妊娠期糖尿病大鼠的胎鼠肺结构和肺表面活性蛋白B、C及其调控因子表达

摘要：目的 通过对GDM大鼠胎鼠的肺组织结构及肺表面活性蛋白(surfactant proteins,SP)-B、SP-C、甲状腺转录因子(thyroid transcription factor,TTF)-1、多形性腺瘤样因子(pleiomorphic adenoma gene like,PLAGL)-2蛋白表达水平进行研究,探讨GDM大鼠胎鼠肺发育障碍的机制. 方法 清洁级健康成年Sprague-Dawley大鼠构建孕鼠GDM模型,共20只造模成功,对照组为20只正常孕鼠.于妊娠第21天检测孕鼠随机血糖,并行剖宫取胎术,胎鼠计数并称重.透射电子显微镜下观察肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构.每组随机取60只胎鼠,取肺组织制作360张石蜡切片,随机取100张不连续切片,光镜下观察肺组织形态结构;随机取另外100张不连续切片,免疫组织化学法检测SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白定位及表达.每组取9只胎鼠,蛋白质印迹技术检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-l和PLAGL-2蛋白水平.每组取27只胎鼠,荧光实时定量聚合酶链反应检测胎鼠肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的mRNA水平.采用独立样本t检验进行统计学分析. 结果 GDM组孕鼠平均随机血糖值高于对照组[(26.8±2.8)与(4.9±0.5)mmol/L,t=-34.05,P=0.00].GDM组胎鼠平均体重高于对照组[(5.6±0.6)与(5.2±0.5)g,t=-1.97,P=o.03].GDM组与对照组肺泡个数分别为(10.1±1.6)与(12.1±1.3)个,肺泡面积分别为(986.9±5.5)与(1 257.3±5.0) μm2,GDM组均低于对照组(t值分别为9.84和27.53);肺泡间隔分别为(11.5±6.2)与(9.9±4.3)μm,GDM组高于对照组(t=-2.17),差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).透射电镜下,可见GDM组肺泡Ⅱ型上皮细胞表面微绒毛粗短、减少,板层小体数量减少.胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2蛋白均沿胞浆呈颗粒状分布,GDM组4种蛋白表达的平均吸光度分别为1.15±0.12、1.23±0.06、0.87±0.21与1.21±0.18,对照组分别为1.22±0.05、1.31±0.14、1.12±0.09与1.33±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为2.40、2.35、4.89和2.77,P值均＜0.01).GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2的蛋白水平分别为0.57±0.09、0.45±0.03、1.50±0.04和1.11±0.04,对照组分别为0.81±0.03、0.66±0.04、1.69±0.05和1.46±0.07,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为11.77、11.09、8.80和13.37,P值均＜0.01).GDM组胎肺组织中SP-B、SP-C、TTF-1和PLAGL-2mRNA水平分别为0.60±0.04、0.79±0.04、0.81±0.03和0.79±0.05,对照组分别为1.06±0.19、1.03±0.24、1.03±0.18和1.02±0.19,GDM组均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为6.80、2.98、3.54和3.54,P值均＜0.01). 结论 GDM大鼠的胎鼠肺组织中SP-B和SP-C蛋白水平均明显下降,可能由于TTF-1和/或PLAGL-2基因表达下调所致;SP-B和SP-C蛋白减少与胎肺结构的病理变化有密切关联.